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SYBR?GreenⅠ(熒光定量PCR )

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Cas號
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分子量
產品參數 產品說明:

SYBR Green I 染料是一種直接與雙鏈 DNA (dsDNA) 結合的熒光染料,是熒光定量PCR 最常用的DNA結合染料。在定量 PCR中,SYBR Green I可與雙鏈DNA(dsDNA)非特異性結合后發出熒光,則可以通過檢測反應體系中的SYBR Green I 熒光強度,達到檢測PCR 產物擴增量的目的。游離狀態下,SYBR Green I發出微弱的熒光,一旦與dsDNA結合,其熒光增加1000倍,一個反應發出的全部熒光信號與出現的dsDNA量成比例,且會隨擴增產物的增加而增加;所以通過檢測PCR 反應液中的熒光信號強度,可以對目的基因進行準確定量,同時還可以測定擴增的目的DNA片段的熔解溫度。

使用說明:

使用時,配置PCR反應混合液,將10000×SYBR Green I濃縮液加入到PCR反應體系,使終濃度為0.5× (0.2×到1×之間調整)。以上操作建議在冰上進行。

注:① 反應液配制方法和PCR 擴增條件請參照DNA聚合酶使用說明。

② Realtime PCR 擴增儀的使用方法,請參照各儀器說明書。

注意事項:

使用濃度對熒光PCR結果的影響

SYBR Green I的使用濃度是保證熒光定量PCR實驗成功非常關鍵的因素。如果SYBR Green I的濃度過低會使熒光信號的變化降低,這就意味著低拷貝的樣品可能無法檢出;而在高濃度時,將會抑制PCR反應,降低PCR反應效率。所以一般在使用SYBR Green I時應根據實際情況優化使用濃度,反應的終濃度為0.2×到1×之間。

鎂離子濃度的影響

提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對PCR反應的抑制作用。我們建議在用SYBR Green I進行熒光PCR反應時,鎂離子濃度比無SYBR Green I 的普通 PCR 反應高出0.5~3mM。
性狀
貯存 -20℃避光保存,有效期至少一年。
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